Сборка Гибсона
Добавьте фрагменты в порядке сборки 5′ → 3′ и получите праймеры с перекрытиями
Успешная сборка
0 п.о.
Tm отжига
Цель для Tm отжига влияет на PCR-часть праймера. Tm перекрытия оценивается отдельно и не обязан расти вместе с отжигом.
Как читать уровни риска
Критично
сильная структура на 3'-конце участка отжига; это чаще всего реально мешает PCR
Внимание
риск есть, но он не обязательно критичен; стоит сравнить альтернативы
Допустимо
структуры есть, но основной риск не в 3'-отжиге
Как читать Tm в таблице: слева показан Tm перекрытия для сборки, справа — Tm отжига для PCR. Для Gibson важнее, чтобы участок отжига был рабочим; более низкий Tm перекрытия сам по себе не делает праймер плохим.
Дизайн праймеров
Перекрытие обычно 18-30 п.о.; длина отжига подбирается под целевой Tm отдельно
| Фрагмент | Направление | Последовательность (5' ➔ 3') | Tm (перекрытие / отжиг) П О | Длина |
|---|
Всё для изотермической сборки
Для сборки Гибсона вам потребуются высокоточная полимераза для наработки фрагментов и изотермический микс. Заказывайте реагенты напрямую у нас со склада