Ферменты для белков
Протеаза Kex2
Ферменты для белков
Протеаза Kex2
Ферменты для белков
Протеаза Kex2
TEV-ПРОТЕАЗА
Высокоспецифичная цистеиновая эндопептидаза с внесенными мутациями.
Расщепляет белки по сайту ENLYFQ↓X, где X может быть S, G, A, M, C или H.
Используется для удаления аффинных меток или белков‑партнеров.
Работает в широком диапазоне pH (4.0‑8.5) и температур (4‑34°C).
Активность 2.5 ед./мкл.
Содержит V5 эпитоп и 6х HisTag на С‑конце.
Инактивация после 10 мин при 65°С.
TEV-ПРОТЕАЗА
Высокоспецифичная цистеиновая эндопептидаза с внесенными мутациями.
Расщепляет белки по сайту ENLYFQ↓X, где X может быть S, G, A, M, C или H.
Используется для удаления аффинных меток или белков‑партнеров.
Работает в широком диапазоне pH (4.0‑8.5) и температур (4‑34°C).
Активность 2.5 ед./мкл.
Содержит V5 эпитоп и 6х HisTag на С‑конце.
Инактивация после 10 мин при 65°С.
TEV-ПРОТЕАЗА
Высокоспецифичная цистеиновая эндопептидаза с внесенными мутациями.
Расщепляет белки по сайту ENLYFQ↓X, где X может быть S, G, A, M, C или H.
Используется для удаления аффинных меток или белков‑партнеров.
Работает в широком диапазоне pH (4.0‑8.5) и температур (4‑34°C).
Активность 2.5 ед./мкл.
Содержит V5 эпитоп и 6х HisTag на С‑конце.
Инактивация после 10 мин при 65°С.
TEV‑протеаза, 2.5 ед/мкл, 400 мкл, M
Цена:
5 000 ₽
TEV‑протеаза, 2.5 ед/мкл, 400 мкл, M
Цена:
5 000 ₽
Описание
TEV‑протеаза Клонинг Фасилити — каталитический домен белка NIa вируса гравировки табака (Tobacco Etch Virus) с дополнительными мутациями для увеличения стабильности и активности, экспрессированная в E. coli (штамм Rosetta gami 2 (DE3)).
Описание
TEV‑протеаза Клонинг Фасилити — каталитический домен белка NIa вируса гравировки табака (Tobacco Etch Virus) с дополнительными мутациями для увеличения стабильности и активности, экспрессированная в E. coli (штамм Rosetta gami 2 (DE3)).
Описание
TEV‑протеаза Клонинг Фасилити — каталитический домен белка NIa вируса гравировки табака (Tobacco Etch Virus) с дополнительными мутациями для увеличения стабильности и активности, экспрессированная в E. coli (штамм Rosetta gami 2 (DE3)).
Aктивность
Одна единица активности соответствует количеству фермента, необходимому для расщепления 1 мкг химерного рекомбинантного белка (~54,7 кДа mScarlet3‑mNeonGreen) до глубины гидролиза 90% в общем реакционном объеме 10 мкл за 1 час при 25°С в стандартном реакционном буфере.
Aктивность
Одна единица активности соответствует количеству фермента, необходимому для расщепления 1 мкг химерного рекомбинантного белка (~54,7 кДа mScarlet3‑mNeonGreen) до глубины гидролиза 90% в общем реакционном объеме 10 мкл за 1 час при 25°С в стандартном реакционном буфере.
Aктивность
Одна единица активности соответствует количеству фермента, необходимому для расщепления 1 мкг химерного рекомбинантного белка (~54,7 кДа mScarlet3‑mNeonGreen) до глубины гидролиза 90% в общем реакционном объеме 10 мкл за 1 час при 25°С в стандартном реакционном буфере.
Спецификации
Ферментный препарат поставляется в виде:
Раствор TEV‑протеазы 2.5 ед./мкл в буфере для хранения, 400 мкл.
20х Реакционный буфер, 1 мл.
100x раствор 0.1М DTT, 200 мкл.
Контрольный белок с концентрацией 2 мкг/мкл, 50 мкл буфера.
Спецификации
Ферментный препарат поставляется в виде:
Раствор TEV‑протеазы 2.5 ед./мкл в буфере для хранения, 400 мкл.
20х Реакционный буфер, 1 мл.
100x раствор 0.1М DTT, 200 мкл.
Контрольный белок с концентрацией 2 мкг/мкл, 50 мкл буфера.
Спецификации
Ферментный препарат поставляется в виде:
Раствор TEV‑протеазы 2.5 ед./мкл в буфере для хранения, 400 мкл.
20х Реакционный буфер, 1 мл.
100x раствор 0.1М DTT, 200 мкл.
Контрольный белок с концентрацией 2 мкг/мкл, 50 мкл буфера.
Условия хранения
Рекомбинантная TEV‑протеаза остается стабильной сроком до 1 года при ‑20°С с даты получения. Допускается транспортировка при температуре не выше +8°С в течении 24 часов.
Избегайте повторяющихся циклов оттаивания‑замораживания, а также замораживания при ‑70°С. Вспомогательные растворы хранить при ‑20°С.
Условия хранения
Рекомбинантная TEV‑протеаза остается стабильной сроком до 1 года при ‑20°С с даты получения. Допускается транспортировка при температуре не выше +8°С в течении 24 часов.
Избегайте повторяющихся циклов оттаивания‑замораживания, а также замораживания при ‑70°С. Вспомогательные растворы хранить при ‑20°С.
Условия хранения
Рекомбинантная TEV‑протеаза остается стабильной сроком до 1 года при ‑20°С с даты получения. Допускается транспортировка при температуре не выше +8°С в течении 24 часов.
Избегайте повторяющихся циклов оттаивания‑замораживания, а также замораживания при ‑70°С. Вспомогательные растворы хранить при ‑20°С.
Состав буфера для хранения
25 мМ Tris‑HCl (pH 8.0)
25 мМ Tris‑HCl (pH 8.0)
25 мМ Tris‑HCl (pH 8.0)
200 мМ NaCl
200 мМ NaCl
200 мМ NaCl
2 мМ ЭДТА
2 мМ ЭДТА
2 мМ ЭДТА
5 мМ бета‑меркаптоэтанол
5 мМ бета‑меркаптоэтанол
5 мМ бета‑меркаптоэтанол
50% глицерин
50% глицерин
50% глицерин
Состав реакционного буфера
1 M Tris‑HCl (pH 8.0)
1 M Tris‑HCl (pH 8.0)
1 M Tris‑HCl (pH 8.0)
10 мМ ЭДТА
10 мМ ЭДТА
10 мМ ЭДТА
Состав буфера для хранения контрольного буфера
50 мМ Tris‑HCl (pH 7.5)
50 мМ Tris‑HCl (pH 7.5)
50 мМ Tris‑HCl (pH 7.5)
0.5 мМ ЭДТА
0.5 мМ ЭДТА
0.5 мМ ЭДТА
1 мМ DTT
1 мМ DTT
1 мМ DTT
Протоколы применения
Диализовать белок против 20 мМ Tris‑HCl, pH 7.5.
Определить концентрацию белка.
К 10‑30 μg (0.2 наномоль) белкового субстрата добавить воду (если необходимо) до общего объема 85 μl.
Добавить 10 μl Реакционного буфера (10X).
Добавить 1 μl 100 мМ DTT (100x).
Добавить 4 μl (10 ед) of TEV‑протеазы. Общий объем реакции составит 100 мкл.
Инкубировать при 30°C 1 час или при 4°C ночь. Рекомендуется взять 10 мкл пробы на 2, 4 и 6 часу инкубации и нанести на SDS‑PAGE форез для проверки степени протеолитического расщепления.
Протоколы применения
Диализовать белок против 20 мМ Tris‑HCl, pH 7.5.
Определить концентрацию белка.
К 10‑30 μg (0.2 наномоль) белкового субстрата добавить воду (если необходимо) до общего объема 85 μl.
Добавить 10 μl Реакционного буфера (10X).
Добавить 1 μl 100 мМ DTT (100x).
Добавить 4 μl (10 ед) of TEV‑протеазы. Общий объем реакции составит 100 мкл.
Инкубировать при 30°C 1 час или при 4°C ночь. Рекомендуется взять 10 мкл пробы на 2, 4 и 6 часу инкубации и нанести на SDS‑PAGE форез для проверки степени протеолитического расщепления.
Протоколы применения
Диализовать белок против 20 мМ Tris‑HCl, pH 7.5.
Определить концентрацию белка.
К 10‑30 μg (0.2 наномоль) белкового субстрата добавить воду (если необходимо) до общего объема 85 μl.
Добавить 10 μl Реакционного буфера (10X).
Добавить 1 μl 100 мМ DTT (100x).
Добавить 4 μl (10 ед) of TEV‑протеазы. Общий объем реакции составит 100 мкл.
Инкубировать при 30°C 1 час или при 4°C ночь. Рекомендуется взять 10 мкл пробы на 2, 4 и 6 часу инкубации и нанести на SDS‑PAGE форез для проверки степени протеолитического расщепления.
Динамика гидролиза контрольного белка при различных температурах
Время
0,5 ч
1 ч
2 ч
3 ч
Степень гидролиза субстрата, %
4°С
34
58
71
84
16°С
58
80
99
99
21°С
56
78
99
99
30°С
77
90
99
99
Таблица 1.
Гидролиз 3 мкг контрольного субстрата с 1 ед. TEV‑протеазы при разных температурах.
Таблица 1.
Гидролиз 3 мкг контрольного субстрата с 1 ед. TEV‑протеазы при разных температурах.
Советы от R&D отдела
Предлагаемый реакционный буфер является оптимальным для проведения реакции протеолиза, но в случае необходимости может быть заменен на MES, HEPES, калий‑фосфатный и натрий‑ацетатный буферы имеющие значение pH между 6 и 9.
Предлагаемый реакционный буфер является оптимальным для проведения реакции протеолиза, но в случае необходимости может быть заменен на MES, HEPES, калий‑фосфатный и натрий‑ацетатный буферы имеющие значение pH между 6 и 9.
Предлагаемый реакционный буфер является оптимальным для проведения реакции протеолиза, но в случае необходимости может быть заменен на MES, HEPES, калий‑фосфатный и натрий‑ацетатный буферы имеющие значение pH между 6 и 9.
Если образец химерного белка для порезки содержит > 2 M мочевины, > 0.5 M гуанидин гидрохлорида, > 50 мМ имидазола, ингибиторы цистеиновых протеаз, имеет значение pH вне оптимального (6‑9), то необходимо диализовать образец перед порезкой.
Если образец химерного белка для порезки содержит > 2 M мочевины, > 0.5 M гуанидин гидрохлорида, > 50 мМ имидазола, ингибиторы цистеиновых протеаз, имеет значение pH вне оптимального (6‑9), то необходимо диализовать образец перед порезкой.
Если образец химерного белка для порезки содержит > 2 M мочевины, > 0.5 M гуанидин гидрохлорида, > 50 мМ имидазола, ингибиторы цистеиновых протеаз, имеет значение pH вне оптимального (6‑9), то необходимо диализовать образец перед порезкой.
Некоторые субстраты могут потребовать более длительной инкубации до 3‑х дней и при 4°С, и при 30°С. Для достижения полного разрезания к реакционной смеси добавьте свежую порцию протеазы и оставьте дополнительно на ночь.
Некоторые субстраты могут потребовать более длительной инкубации до 3‑х дней и при 4°С, и при 30°С. Для достижения полного разрезания к реакционной смеси добавьте свежую порцию протеазы и оставьте дополнительно на ночь.
Некоторые субстраты могут потребовать более длительной инкубации до 3‑х дней и при 4°С, и при 30°С. Для достижения полного разрезания к реакционной смеси добавьте свежую порцию протеазы и оставьте дополнительно на ночь.
Хорошим правилом является использование 1 ед. OD280 TEV‑протеазы в соотношении к 50‑100 ед. OD280 расщепляемого белка в течение ночи при 4°С или в течение 1 часа при 30°С. Предварительно рекомендуется поставить реакцию в малом масштабе для подбора условий. В особенно трудных случаях соотношение может доходить до 1:5.
Хорошим правилом является использование 1 ед. OD280 TEV‑протеазы в соотношении к 50‑100 ед. OD280 расщепляемого белка в течение ночи при 4°С или в течение 1 часа при 30°С. Предварительно рекомендуется поставить реакцию в малом масштабе для подбора условий. В особенно трудных случаях соотношение может доходить до 1:5.
Хорошим правилом является использование 1 ед. OD280 TEV‑протеазы в соотношении к 50‑100 ед. OD280 расщепляемого белка в течение ночи при 4°С или в течение 1 часа при 30°С. Предварительно рекомендуется поставить реакцию в малом масштабе для подбора условий. В особенно трудных случаях соотношение может доходить до 1:5.
При 4°C активность снижается примерно в 10 раз, а при температурах выше 37°C быстро уменьшается из‑за денатурации.
При 4°C активность снижается примерно в 10 раз, а при температурах выше 37°C быстро уменьшается из‑за денатурации.
При 4°C активность снижается примерно в 10 раз, а при температурах выше 37°C быстро уменьшается из‑за денатурации.
Частые вопросы
Мой белок содержит дисульфидные связи. Нужно ли добавлять DTT?
Мой белок содержит дисульфидные связи. Нужно ли добавлять DTT?
Почему протеаза не режет мой белок, хотя сайт на месте?
Почему протеаза не режет мой белок, хотя сайт на месте?
Как мне полностью избавиться от протеазы после реакции?
Как мне полностью избавиться от протеазы после реакции?
Совместима ли протеаза с ингибиторами, которые я добавляю при лизисе?
Совместима ли протеаза с ингибиторами, которые я добавляю при лизисе?
Что представляет собой контрольный белок?
Что представляет собой контрольный белок?
С этим товаром покупают
Ферменты для белков
ЗАЯВКА НА ЗАКАЗ TEV-ПРОТЕАЗЫ
© КЛОНИНГ ФАСИЛИТИ
Москва, территория ИБХ РАН, улица Миклухо‑Маклая, 16/10 (на Яндекс Картах)
Почтовый адрес: 117437 Москва, а/я 18, АО "КЛОНИНГ ФАСИЛИТИ"
© КЛОНИНГ ФАСИЛИТИ
Москва, территория ИБХ РАН, улица Миклухо‑Маклая, 16/10 (на Яндекс Картах)
Почтовый адрес: 117437 Москва, а/я 18, АО "КЛОНИНГ ФАСИЛИТИ"
© КЛОНИНГ ФАСИЛИТИ
Москва, территория ИБХ РАН, улица Миклухо‑Маклая, 16/10 (на Яндекс Картах)
Почтовый адрес: 117437 Москва, а/я 18, АО "КЛОНИНГ ФАСИЛИТИ"
© КЛОНИНГ ФАСИЛИТИ
Москва, территория ИБХ РАН, улица Миклухо‑Маклая, 16/10 (на Яндекс Картах)
Почтовый адрес: 117437 Москва, а/я 18, АО "КЛОНИНГ ФАСИЛИТИ"
© КЛОНИНГ ФАСИЛИТИ
Москва, территория ИБХ РАН, улица Миклухо‑Маклая, 16/10 (на Яндекс Картах)
Почтовый адрес: 117437 Москва, а/я 18, АО "КЛОНИНГ ФАСИЛИТИ"