IdeS протеаза
1. Описание
2. Протокол использования
СТАНДАРТНЫЙ ГИДРОЛИЗ IgG
1. Смешайте иммуноглобулин G и 10X реакционный буфер.
2. Рекомендуемая концентрация субстрата в реакции — 0.5 мкг/мкл.
3. Добавьте протеазу IdeS из расчета 1 ед.на 1 мкг IgG.
4. Инкубируйте смесь 30–60 минут при 37°C.
3. Советы от R&D отдела
- Фермент сохраняет высокую активность в PBS, Tris и HEPES (pH 6.0–8.0). Оптимальное значение pH — 6.6.
- Продукт не работает на мышиных IgG1 и IgG2b. Для мышиных IgG2a и IgG3 мы рекомендуем увеличить дозировку фермента в 5–10 раз.
- Избегайте многократных циклов замораживания-размораживания для реакционного буфера (рекомендуется аликвотирование)
4. Частые вопросы (FAQ)
В: Почему IdeS лучше пепсина для получения фрагментов?
О: IdeS режет строго в одном месте, тогда как пепсин часто дает смесь фрагментов из-за множественных сайтов расщепления. Это критично для аналитического контроля и задач QC.
В: Какие есть ограничения на использование IdeS с иммуноглобулинами разных видов?
О: IgG крысы, свиньи, коровы и козы не расщепляются данным ферментом.
В: Можно ли использовать IdeS на антителах других классов, например IgA или IgM?
О: Нет. IdeS обладает строгой специфичностью исключительно к иммуноглобулинам класса IgG.
5. Спецификация набора
1 пробирка : 1 мл 10х реакционного буфера
1 пробирка : 1 мл 10х реакционного буфера
6. Характеристики
| Активность | >150 ед./мкл. |
| Инактивация | Фермент удаляется методами аффинной очистки. |
7. Состав растворов
Буфер для хранения: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 150 mM имидазол, 2.5 mM TCEP, 50% глицерин
10× Реакционный буфер: 500 mM Tris-HCl (pH 6.6), 1.5 M NaCl.
8. Ключевые определения
За одну единицу активности принято количество фермента, которое расщепляет 1 мкг рекомбинантного иммуноглобулина G за 30 минут при 37°C в реакционном буфере.
9. Условия хранения
Хранить при температуре -20°C