Клонинг Фасилити — Реактивы для учёных

Инструкция к набору

Т4 ДНК лигаза

Состав набора

Раствор T4 ДНК лигазы

В буфере 20 мМ Tris‑HCl (pH 7.5), 50 мМ KCl, 1 мМ DTT, 0.1 мМ ЭДТА, 50% глицерин, 1 пробирка (40 или 200 мкл).

Раствор T4 ДНК лигазы

В буфере 20 мМ Tris‑HCl (pH 7.5), 50 мМ KCl, 1 мМ DTT, 0.1 мМ ЭДТА, 50% глицерин, 1 пробирка (40 или 200 мкл).

Раствор T4 ДНК лигазы

В буфере 20 мМ Tris‑HCl (pH 7.5), 50 мМ KCl, 1 мМ DTT, 0.1 мМ ЭДТА, 50% глицерин, 1 пробирка (40 или 200 мкл).

Раствор T4 ДНК лигазы

В буфере 20 мМ Tris‑HCl (pH 7.5), 50 мМ KCl, 1 мМ DTT, 0.1 мМ ЭДТА, 50% глицерин, 1 пробирка (40 или 200 мкл).

10х буфер

Реакционный буфер, 400 мМ Tris‑HCl, 100 мМ MgCl₂, 100 мМ DTT, 5 мМ АТФ, pH = 7.8, 1 пробирка (0.5 или 1.5 мл).

10х буфер

Реакционный буфер, 400 мМ Tris‑HCl, 100 мМ MgCl₂, 100 мМ DTT, 5 мМ АТФ, pH = 7.8, 1 пробирка (0.5 или 1.5 мл).

10х буфер

Реакционный буфер, 400 мМ Tris‑HCl, 100 мМ MgCl₂, 100 мМ DTT, 5 мМ АТФ, pH = 7.8, 1 пробирка (0.5 или 1.5 мл).

10х буфер

Реакционный буфер, 400 мМ Tris‑HCl, 100 мМ MgCl₂, 100 мМ DTT, 5 мМ АТФ, pH = 7.8, 1 пробирка (0.5 или 1.5 мл).

Условия хранения и использование

Хранить при ‑20°С. Для реакционного буфера избегать многократных циклов замораживания и размораживания. Рекомендуется сделать аликвоты реакционного буфера для однократного использования.

Условия хранения и использование

Активность

Рекомбинантная Т4 ДНК Лигаза Клонинг Фасилити обладает активностью 5 ед./мкл по Вейсу, что эквивалентно 1000 ед./мкл в единицах лигирования липких концов.

Активность

Протоколы сборки

Протокол сборки по технологии Golden Gate

Протокол клонирования классическим методом «рестрикция — лигирование»

Протокол лигирования по тупым концам (Blunt‑end ligation)

Протокол закольцовывания линейной ДНК

Лигирование адаптеров

Протокол сборки по технологии Golden Gate

В основе метода Golden Gate лежит использование рестриктаз IIs типа, например, BsaI, BpiI или Esp3I, которые разрезают ДНК вне своих сайтов узнавания, создавая уникальные липкие концы. Эти концы позволяют фрагментам ДНК соединяться в заданном порядке бесшовно. После лигирования сайты узнавания рестриктазы исчезают из итоговой последовательности, что делает реакцию необратимой и предотвращает повторное разрезание собранной конструкции.

Кроме того, этот метод клонирования позволяет быстро и точно собирать до 10 и более фрагментов ДНК в одну молекулу одновременно. Golden Gate часто применяется для модульной сборки генов.

Протокол сборки по технологии Golden Gate

Подготовка реакционной смеси

1. Проведение реакции Golden Gate

2. Трансформация компетентных клеток

3. Получение плазмидной ДНК

Список протоколов

Протокол клонирования классическим методом «рестрикция — лигирование»

Подготовка реакционной смеси

1. Рестрикция вектора и вставки

2. Лигирование вставки ДНК в вектор

Список протоколов

Протокол лигирования по тупым концам (Blunt‑end ligation)

Подготовка реакционной смеси

Лигирование по тупым концам (Blunt‑end ligation)

Список протоколов

Протокол закольцовывания линейной ДНК

Подготовка реакционной смеси

Закольцовывание линейной ДНК

Примечания:

В качестве вставки в акцептор можно использовать димеры олигонуклеотидов с выступающими концами, лигирование в этом случае образует никованные плазмиды, которые после трансформации в E. coli репарируются в клетке.
Эффективность трансформации можно повысить:
- инактивацией лигазы при 65°C в течение 10 мин или при 70°C в течение 5 мин;
- очисткой ДНК на колонках.

Примечания:

В качестве вставки в акцептор можно использовать димеры олигонуклеотидов с выступающими концами, лигирование в этом случае образует никованные плазмиды, которые после трансформации в E. coli репарируются в клетке.
Эффективность трансформации можно повысить:
- инактивацией лигазы при 65°C в течение 10 мин или при 70°C в течение 5 мин;
- очисткой ДНК на колонках.

Примечания:

В качестве вставки в акцептор можно использовать димеры олигонуклеотидов с выступающими концами, лигирование в этом случае образует никованные плазмиды, которые после трансформации в E.coli репарируются в клетке.
Эффективность трансформации можно повысить:
- инактивацией лигазы при 65°C в течение 10 мин или при 70°C в течение 5 мин;
- очисткой ДНК на колонках.
Не превышайте рекомендуемое количество лигазы в смеси.
Связывание лигазы или рестриктазы с ДНК может вызывать сдвиг полос в агарозном геле. Чтобы этого избежать, инкубируйте образцы при 65°C в течение 10 мин и охладите на льду перед загрузкой.
Для эффективной трансформации объем смеси для лигирования не должен превышать 10% от объема компетентных клеток.

Примечания:

В качестве вставки в акцептор можно использовать димеры олигонуклеотидов с выступающими концами, лигирование в этом случае образует никованные плазмиды, которые после трансформации в E. coli репарируются в клетке.
Эффективность трансформации можно повысить:
- инактивацией лигазы при 65°C в течение 10 мин или при 70°C в течение 5 мин;
- очисткой ДНК на колонках.

Примечания:

В качестве вставки в акцептор можно использовать димеры олигонуклеотидов с выступающими концами, лигирование в этом случае образует никованные плазмиды, которые после трансформации в E.coli репарируются в клетке.
Эффективность трансформации можно повысить:
- инактивацией лигазы при 65°C в течение 10 мин или при 70°C в течение 5 мин;
- очисткой ДНК на колонках.
Не превышайте рекомендуемое количество лигазы в смеси.
Связывание лигазы или рестриктазы с ДНК может вызывать сдвиг полос в агарозном геле. Чтобы этого избежать, инкубируйте образцы при 65°C в течение 10 мин и охладите на льду перед загрузкой.
Для эффективной трансформации объем смеси для лигирования не должен превышать 10% от объема компетентных клеток.

Не превышайте рекомендуемое количество лигазы в смеси.
Связывание лигазы или рестриктазы с ДНК может вызывать сдвиг полос в агарозном геле. Чтобы этого избежать, инкубируйте образцы при 65°C в течение 10 мин и охладите на льду перед загрузкой.
Для эффективной трансформации объем смеси для лигирования не должен превышать 10% от объема компетентных клеток.

Не превышайте рекомендуемое количество лигазы в смеси.
Связывание лигазы или рестриктазы с ДНК может вызывать сдвиг полос в агарозном геле. Чтобы этого избежать, инкубируйте образцы при 65°C в течение 10 мин и охладите на льду перед загрузкой.
Для эффективной трансформации объем смеси для лигирования не должен превышать 10% от объема компетентных клеток.

Не превышайте рекомендуемое количество лигазы в смеси.
Связывание лигазы или рестриктазы с ДНК может вызывать сдвиг полос в агарозном геле. Чтобы этого избежать, инкубируйте образцы при 65°C в течение 10 мин и охладите на льду перед загрузкой.
Для эффективной трансформации объем смеси для лигирования не должен превышать 10% от объема компетентных клеток.

Список протоколов

Лигирование адаптеров

Т4 ДНК лигаза часто используется для добавления адаптеров к фрагментам ДНК по липким A/T концам для последующего захвата и чтения различными платформами секвенирования.

Некоторые протоколы допускают лигирование адаптеров по тупым концам, но эффективность лигирования будет ниже.

Применение Т4 ДНК лигазы зависит от конкретного протокола секвенирования.

Лигирование адаптеров

Список протоколов

Инструкция к набору

Инструкция к набору

Инструкция к набору

Инструкция к набору

Т4 ДНК лигаза

Т4 ДНК лигаза

Состав набора

Состав набора

Состав набора

Состав набора

Условия хранения и использование

Условия хранения и использование

Условия хранения и использование

Условия хранения и использование

Активность

Активность

Активность

Активность

Протоколы сборки

Протоколы сборки

Протоколы сборки

Протоколы сборки

Протоколы сборки

Протокол сборки по технологии Golden Gate

Протокол сборки по технологии Golden Gate

Протокол сборки по технологии Golden Gate

Протокол сборки по технологии Golden Gate

Протокол сборки по технологии Golden Gate

Протокол клонирования классическим методом «рестрикция — лигирование»

Протокол клонирования классическим методом «рестрикция — лигирование»

Протокол клонирования классическим методом «рестрикция — лигирование»

Протокол клонирования классическим методом «рестрикция — лигирование»

Протокол клонирования классическим методом «рестрикция — лигирование»

Протокол лигирования по тупым концам (Blunt‑end ligation)

Протокол лигирования по тупым концам (Blunt‑end ligation)

Протокол лигирования по тупым концам (Blunt‑end ligation)

Протокол лигирования по тупым концам (Blunt‑end ligation)

Протокол лигирования по тупым концам (Blunt‑end ligation)

Протокол закольцовывания линейной ДНК

Протокол закольцовывания линейной ДНК

Протокол закольцовывания линейной ДНК

Протокол закольцовывания линейной ДНК

Протокол закольцовывания линейной ДНК

Лигирование адаптеров

Лигирование адаптеров

Лигирование адаптеров

Лигирование адаптеров

Лигирование адаптеров

Протокол сборки по технологии Golden Gate

Протокол сборки по технологии Golden Gate

Протокол сборки по технологии Golden Gate

Протокол сборки по технологии Golden Gate

Протокол сборки по технологии Golden Gate

Протокол клонирования классическим методом «рестрикция — лигирование»

Протокол клонирования классическим методом «рестрикция — лигирование»

Протокол клонирования классическим методом «рестрикция — лигирование»

Протокол клонирования классическим методом «рестрикция — лигирование»

Протокол клонирования классическим методом «рестрикция — лигирование»

Протокол лигирования по тупым концам (Blunt‑end ligation)

Протокол лигирования по тупым концам (Blunt‑end ligation)

Протокол лигирования по тупым концам (Blunt‑end ligation)

Протокол лигирования по тупым концам (Blunt‑end ligation)

Протокол лигирования по тупым концам (Blunt‑end ligation)

Протокол закольцовывания линейной ДНК

Протокол закольцовывания линейной ДНК

Протокол закольцовывания линейной ДНК

Протокол закольцовывания линейной ДНК

Протокол закольцовывания линейной ДНК

Лигирование адаптеров

Лигирование адаптеров

Лигирование адаптеров

Лигирование адаптеров

Лигирование адаптеров

Услуги

Продукты

Частые вопросы

О компании

Услуги

Продукты

Частые вопросы