Рестриктаза HindIII

1. Описание

HindIII — эндонуклеаза рестрикции из Haemophilus influenzae Rd, экспрессированная в клетках E. coli. Изошизомеры: SsbI.

2. Протокол использования

Стандартная рестрикция

1. Смешайте: ДНК 1000 нг, 5 мкл 10X CutFast Buffer, воды до 49 мкл.

2. Добавьте 1 мкл рестриктазы.

3. Инкубируйте при 37°C 30–60 минут.

3. Советы от R&D отдела

  • На эффективность рестрикции сильно влияет чистота выделенной плазмиды (остатки этанола или фенола снижают активность).
  • Во избежание появления звездчатой активности не рекомендуется добавлять фермент в объеме более 10% от общей реакционной смеси.
  • Для препаративной рестрикции (ДНК > 1 мкг) подбирайте объем так, чтобы концентрация ДНК была 100-150 нг/мкл.
  • На 100 мкл реакционной смеси рекомендуется добавлять не менее 3 мкл HindIII.
  • HindIII нечувствителен к Dam и Dcm метилированию, однако работа может быть заблокирована CpG-метилированием, если сайт перекрывается с CpG-динуклеотидом.

4. Спецификация набора

500 реакций
1 пробирка: 500 мкл фермента в буфере для хранения
1 пробирка: 1.5 мл 10X реакционного буфера
1 пробирка: 1.5 мл 6X буфера для нанесения ДНК Нуар
1500 реакций
3 пробирки по 500 мкл фермента в буфере для хранения
2 пробирки по 1.5 мл 10X реакционного буфера
1 пробирка: 1.5 мл 6X буфера для нанесения ДНК Нуар

5. Характеристики

Активность 10 ед./мкл
Инактивация Полная инактивация при 80°C, 20 мин

6. Состав растворов

Буфер для хранения: 10 мМ Tris-HCl (pH 7.4), 250 мМ NaCl, 1 мМ DTT, 0.1 мМ EDTA, 500 мкг/мл БСА, 50% глицерин
Буфер CutFast (10X): 500 мМ KOAc, 200 мМ Tris-OAc, 100 мМ Mg(OAc)2, 1 мг/мл БСА, pH 7.9

7. Ключевые определения

За одну единицу активности принято количество фермента, которое за 60 минут при 37°C полностью расщепляет 1 мкг ДНК фага λ в реакционном объеме 50 мкл.

8. Условия хранения

Срок годности — 1 год. Фермент и реакционный буфер необходимо хранить при температуре -20°C.

9. Документация и сертификаты