Рестриктаза HgaI

1. Описание

HgaI — эндонуклеаза из Haemophilus gallinarum, экспрессированная в клетках E. coli.

2. Протокол использования

Стандартная рестрикция

1. Смешайте: ДНК 1000 нг, 5 мкл 10X CutFast Buffer, воды до 49 мкл.

2. Добавьте 1-2 мкл рестриктазы.

3. Инкубируйте при 37°C 30–60 минут.

3. Советы от R&D отдела

  • На эффективность рестрикции сильно влияет чистота выделенной плазмиды. Наличие этанола, изопропанола, фенола или хлороформа, сорбента для выделения ДНК сильно снижают активность рестриктазы.
  • 1 мкл фермента можно использовать для рестрикции в объеме меньше 50 мкл. Во избежание появления неспецифической активности не рекомендуется добавлять рестриктазу больше чем 10% от объема реакционной смеси.
  • Для препаративной рестрикции при количестве ДНК более 1 мкг необходимо подобрать общий объем реакции так, чтобы итоговая концентрация ДНК была 100-150 нг/мкл. На 100 мкл реакционной смеси следует добавлять не менее 3 мкл рестриктазы.
  • Избегайте многократных циклов замораживания-размораживания для реакционного буфера (рекомендуется аликвотирование).
  • Рестриктаза нечувствительна к Dam и Dcm метилированию, однако метилированные CpG блокируют активность рестриктазы.

4. Спецификация набора

25 реакций
1 пробирка: 50 мкл фермента в буфере для хранения
1 пробирка: 0.5 мл 10X реакционного буфера
1 пробирка: 1.5 мл 6X буфера для нанесения ДНК Нуар
75 реакций
3 пробирки по 50 мкл фермента в буфере для хранения
1 пробирка: 1.5 мл 10X реакционного буфера
1 пробирка: 1.5 мл 6X буфера для нанесения ДНК Нуар
125 реакций
5 пробирок по 50 мкл фермента в буфере для хранения
1 пробирка: 1.5 мл 10X реакционного буфера

5. Характеристики

Активность 0.5 ед./мкл
Инактивация Полная инактивация при 65°C, 20 мин

6. Состав растворов

Буфер для хранения: 25 мМ HEPES, 250 мМ NaCl, 200 мкг/мл БСА, 50% глицерин (pH 7.4)
Буфер CutFast (10X): 500 мМ KOAc, 200 мМ Tris-OAc, 100 мМ Mg(OAc)2, 1 мг/мл БСА, pH 7.9

7. Ключевые определения

За одну единицу активности принято полное расщепление 1 мкг контрольной плазмидной ДНК за 60 минут при 37°C в 1X буфере CutFast при добавлении 1 мкл HgaI в реакционный объем 50 мкл.

8. Условия хранения

Срок годности — 1 год. Фермент и реакционный буфер необходимо хранить при температуре -20°C.

9. Документация и сертификаты