ДНКаза I XT
1. Описание
2. Протокол использования
ОЧИСТКА РНК И in vitro ТРАНСКРИПЦИЯ
1. Используйте 1 ед. ДНКазы I XT на 1 мкг ДНК в пробе.
2. Инкубируйте не менее 10 минут при 37°C.
3. Оптимально наличие 10 мМ MgCl2 и 1 мМ CaCl2.
4. Фермент можно вносить напрямую в смеси для in vitro транскрипции.
5. В буферах с солью (300 мМ NaCl) увеличьте время инкубации до 15–30 минут.
3. Советы от R&D отдела
- Подходит для устранения геномной ДНК при выделении РНК из сложных образцов.
- Эффективна для удаления ДНК-матрицы после реакций in vitro транскрипции без предварительной смены буфера.
- Может использоваться для анализа доступности хроматина и контролируемого фрагментирования ДНК.
4. Частые вопросы (FAQ)
В: Чем XT версия лучше обычной ДНКазы?
О: Обычная ДНКаза I крайне чувствительна к солям. XT версия сохраняет работоспособность даже при 300 мМ NaCl, что критично для многих промышленных протоколов.
В: Какие ионы необходимы для работы?
О: Для максимальной активности фермента строго необходимо присутствие ионов Mg2+ и Ca2+.
5. Спецификация набора
1 пробирка : 1 мл 10х реакционного буфера
5 пробирок по 1 мл 10х реакционного буфера
6. Характеристики
| Активность | 2 ед./мкл |
| Инактивация | Добавление ЭДТА или химическая денатурация |
7. Состав растворов
Буфер для хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 2 mM CaCl2, 50% глицерин
10х реакционный буфер: 100 mM Tris-HCl (pH 7.5), 500 mM NaCl, 100 mM MgCl2, 10 mM CaCl2
8. Ключевые определения
За одну единицу активности принято количество фермента, которое полностью расщепляет 1 мкг плазмидной ДНК за 10 минут при 37°C в 1х реакционном буфере. При концентрации NaCl 300 мМ полное расщепление достигается за 15 минут.
9. Условия хранения
Хранить при температуре -20°С. Рекомендуется аликвотировать реакционный буфер для однократного использования, избегая циклов замораживания.