ДНКаза I XT

1. Описание

ДНКаза I XT — устойчивая к повышенному содержанию соли форма ДНКазы I из Bos taurus, экспрессированная в P. pastoris.

2. Протокол использования

ОЧИСТКА РНК И in vitro ТРАНСКРИПЦИЯ

1. Используйте 1 ед. ДНКазы I XT на 1 мкг ДНК в пробе.

2. Инкубируйте не менее 10 минут при 37°C.

3. Оптимально наличие 10 мМ MgCl2 и 1 мМ CaCl2.

4. Фермент можно вносить напрямую в смеси для in vitro транскрипции.

5. В буферах с солью (300 мМ NaCl) увеличьте время инкубации до 15–30 минут.

3. Советы от R&D отдела

  • Подходит для устранения геномной ДНК при выделении РНК из сложных образцов.
  • Эффективна для удаления ДНК-матрицы после реакций in vitro транскрипции без предварительной смены буфера.
  • Может использоваться для анализа доступности хроматина и контролируемого фрагментирования ДНК.
  • Сохраняет работоспособность даже при 300 мМ NaCl.
  • Для максимальной активности фермента строго необходимо присутствие ионов Mg2+ и Ca2+.

4. Спецификация набора

200 ед.
1 пробирка: 100 мкл фермента в буфере для хранения
1 пробирка: 1 мл 10X реакционного буфера
2000 ед.
1 пробирка: 1000 мкл фермента в буфере для хранения
5 пробирок по 1 мл 10X реакционного буфера

5. Характеристики

Активность 2 ед./мкл
Инактивация Добавление ЭДТА или химическая денатурация

6. Состав растворов

Буфер для хранения: 10 мМ Tris-HCl (pH 7.5), 2 мМ CaCl2, 50% глицерин
10X реакционный буфер: 100 мМ Tris-HCl (pH 7.5), 500 мМ NaCl, 100 мМ MgCl2, 10 мМ CaCl2

7. Ключевые определения

За одну единицу активности принято количество фермента, которое полностью расщепляет 1 мкг плазмидной ДНК за 10 минут при 37°C в 1X реакционном буфере. При концентрации NaCl 300 мМ полное расщепление достигается за 15 минут.

8. Условия хранения

Срок годности — 2 года. Хранить при температуре -20°C. Рекомендуется аликвотировать реакционный буфер для однократного использования, избегая циклов замораживания.

9. Документация и сертификаты