Карбоксипептидаза Б (CPB)
1. Описание
2. Протокол использования
ВОССТАНОВЛЕНИЕ И РЕАКЦИЯ
1. Лиофилизированный порошок растворите в 1 мл деионизованной воды.
2. Для дальнейшего разведения используйте буфер: 15 мМ MES-Na, 100 мМ NaCl, 0.1% BSA, pH 5.5.
3. Подготовьте целевой белок в буфере с pH 7.5–8.0 (Tris-HCl или фосфатный).
4. Добавьте CPB в массовом соотношении от 1:100 до 1:10 (фермент : субстрат).
5. Инкубируйте не менее 15 минут при 25°C
3. Советы от R&D отдела
- Карбоксипептидаза Б — металлофермент. Присутствие хелаторов, таких как ЭДТА, полностью инактивирует фермент.
- Стабильность фермента выше при pH 5.5, однако максимальная каталитическая активность проявляется в диапазоне pH 7.5–8.0.
- Избегайте хранения аликвот с концентрацией менее 1 мкг/мл, так как это ведет к быстрой потере активности из-за адсорбции белка на стенках пробирки.
4. Частые вопросы (FAQ)
В: Почему ваша CPB лучше, чем очищенная из поджелудочной железы свиньи?
О: Наш продукт не содержит примесей карбоксипептидазы А или химотрипсина, которые часто встречаются в экстрактах. Это гарантирует чистоту вашего конечного белка.
В: Подходит ли CPB для масс-спектрометрии?
О: Да, она идеально подходит для C-концевого секвенирования и картирования пептидов, что критично при регистрации биопрепаратов.
5. Характеристики
| Активность | 30 ед./мг |
| Инактивация | Хелатирующие агенты (ЭДТА) |
6. Спецификация набора
7. Состав растворов
Буфер для хранения: 15 мМ MES-Na, 100 мМ NaCl, 0.1% BSA, pH 5.5.
8. Ключевые определения
За единицу активности принято количество фермента, которое гидролизует 1 мкмоль гиппурил‑L‑аргинина за одну минуту при pH 7.7 и температуре 25°C
9. Условия хранения
Лиофилизат хранить при +4°C. Аликвоты разведенного фермента хранить при -20°C. Избегайте повторных циклов заморозки-разморозки. Не храните аликвоты в объеме менее 10 мкл.