Бензоназа

1. Описание

Эндонуклеаза, расщепляющая дву- и одноцепочечные, линейные и кольцевые формы ДНК и РНК до олигонуклеотидов длиной 3-5 оснований. Рекомбинантный фермент (источник гена — Serratia marcescens) получен в клетках P. pastoris.

2. Протокол использования

СТАНДАРТНЫЙ ПРОТОКОЛ ОЧИСТКИ ЛИЗАТА

1. Добавьте фермент в лизат или культуральную жидкость.

2. Рекомендованная дозировка: 1 ед./мкг нуклеиновых кислот или 200-300 ед./г биомассы. Оптимальные параметры реакции: pH 8.5, 20 мМ NaCl, 37°C, 2 мМ MgCl2.

3. Инкубируйте 20 минут при 37°C.

3. Советы от R&D отдела

  • Фермент сохраняет активность в широком диапазоне: pH 6.0–10.0 и при температуре 0-42°C. Это позволяет проводить очистку даже в холодильнике.
  • При повышенной концентрации NaCl (свыше 300 мМ) или низкой температуре рекомендуется увеличить количество фермента или время инкубации.
  • Используйте нуклеазу для снижения вязкости клеточных лизатов, чтобы упростить последующую фильтрацию и хроматографию.
  • Для активности фермента строго необходимо присутствие ионов Mg2+.

4. Спецификация набора

20 000 ед.
1 пробирка: 100 мкл фермента в буфере для хранения
1 пробирка: 1 мл 10X реакционного буфера
100 000 ед.
1 пробирка: 500 мкл фермента в буфере для хранения
3 пробирки по 1 мл 10X реакционного буфера

5. Характеристики

Активность 200 ед./мкл
Инактивация Термическая или добавление ЭДТА

6. Состав растворов

Буфер для хранения: 20 мМ Tris-HCl (pH 7.9), 2 мМ MgCl2, 20 мМ NaCl, 50% глицерин
10X реакционный буфер: 500 мМ Tris-HCl (pH 8.5), 200 мМ NaCl, 20 мМ MgCl2

7. Ключевые определения

За одну единицу активности принято количество фермента, которое полностью расщепляет 1 мкг ДНК за 20 минут при 37°C в 1X реакционном буфере.

8. Условия хранения

Срок годности — 1 год. Хранить при температуре -20°C. Для реакционного буфера избегайте многократных циклов замораживания и размораживания. Рекомендуется сделать аликвоты реакционного буфера для однократного использования.

9. Документация и сертификаты