Бензоназа
1. Описание
2. Протокол использования
СТАНДАРТНЫЙ ПРОТОКОЛ ОЧИСТКИ ЛИЗАТА
1. Добавьте фермент в лизат или культуральную жидкость.
2. Рекомендованная дозировка: 1 ед./мкг нуклеиновых кислот или 200-300 ед./г биомассы. Оптимальные параметры реакции: pH 8.5, 20 мМ NaCl, 37°C, 2 мМ MgCl2.
3. Инкубируйте 20 минут при 37°C.
3. Советы от R&D отдела
- Фермент сохраняет активность в широком диапазоне: pH 6–10 и температура 0 - 42°C. Это позволяет проводить очистку даже в холодильнике.
- При повышенной концентрации NaCl (свыше 300 мМ) или низкой температуре рекомендуется увеличить количество фермента или время инкубации.
- Используйте нуклеазу для снижения вязкости клеточных лизатов, что значительно упрощает последующую фильтрацию и хроматографию.
4. Частые вопросы (FAQ)
В: В каких задачах применяется Бензоназа?
О: Для очистки от нуклеиновых кислот при выделении белков, в реакциях in vitro трансляции и для подготовки проб в протеомике.
В: Можно ли использовать фермент в неоптимальных буферах?
О: Да, он крайне устойчив. Главное условие — наличие ионов магния, без которых нуклеаза неактивна.
5. Спецификация набора
1 пробирка : 1 мл 10х реакционного буфера
3 пробирки по 1 мл 10х реакционного буфера
6. Характеристики
| Активность | 200 ед./мкл |
| Инактивация | Термическая или добавление ЭДТА |
7. Состав растворов
Буфер для хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.9), 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50% глицерин
10х реакционный буфер: 500 mM Tris-HCl (pH 8.5), 200 mM NaCl, 20 mM MgCl2
8. Ключевые определения
За одну единицу активности принято количество фермента, которое полностью расщепляет 1 мкг ДНК за 20 минут при 37°C в 1x реакционном буфере.
9. Условия хранения
Хранить при температуре -20°С. Для реакционного буфера избегайте многократных циклов замораживания и размораживания. Рекомендуется сделать аликвоты реакционного буфера для однократного использования.