Рестриктаза BamHI
1. Описание
2. Протокол использования
Стандартная рестрикция
1. Смешайте: ДНК (200–1000 нг), 2 мкл 10X CutFast Buffer, воды до 19 мкл.
2. Добавьте 1 мкл рестриктазы.
3. Инкубируйте при 37°C 30–60 минут.
3. Советы от R&D отдела
- На эффективность рестрикции сильно влияет чистота выделенной плазмиды. Наличие этанола, изопропанола, фенола или хлороформа, сорбента для выделения ДНК сильно снижают активность рестриктазы.
- Во избежание появления неспецифической активности не рекомендуется добавлять фермент больше чем 10% от объема реакционной смеси
- Для препаративной рестрикции при количестве ДНК более 1 мкг необходимо подобрать общий объем реакции так, чтобы итоговая концентрация ДНК была 100-150 нг/мкл. На 100 мкл реакционной смеси следует добавлять не менее 2 мкл рестриктазы.
- Избегайте многократных циклов замораживания-размораживания для реакционного буфера (рекомендуется аликвотирование).
4. Частые вопросы (FAQ)
В: Влияет ли метилирование на BamHI?
О: Нет. Рестриктаза нечувствительна к Dam, Dcm и CpG метилированию, что позволяет работать с ДНК из любых источников.
В: Можно ли оставлять реакцию рестрикции на ночь?
О: Да. BamHI не содержит неспецифических экзо- и эндонуклеаз
5. Спецификация набора
1 пробирка : 1.5 мл 10х реакционного буфера
2 пробирки по 1.5 мл 10х реакционного буфера
6. Характеристики
| Активность | 20 ед./мкл |
| Инактивация | Не инактивируется нагреванием |
7. Состав растворов
Буфер для хранения: 10 мМ Tris-HCl, 150 мМ NaCl, 1 мМ DTT, 0.1 мМ EDTA, 200 мкг/мл БСА>, 0.15% Triton X-100, 50% Глицерин (pH 7.5)
Буфер CutFast (10×): 500 мМ KOAc, 200 мМ Tris-OAc, 100 мМ Mg(OAc)2, 1 мг/мл БСА, pH 7.9
8. Ключевые определения
За одну единицу активности принято количество фермента, которое за 60 минут при 37°C полностью расщепляет 1 мкг ДНК фага λ в реакционном объеме 50 мкл.
9. Условия хранения
Фермент и реакционный буфер необходимо хранить при температуре -20°C