Рестриктаза BamHI

1. Описание

BamHI — классическая эндонуклеаза рестрикции из Bacillus amyloliquefaciens H, экспрессированная в клетках E. coli. Изошизомеры: AsiI, Bsp98I.

2. Протокол использования

Стандартная рестрикция

1. Смешайте: ДНК 1000 нг, 5 мкл 10X CutFast Buffer, воды до 49 мкл.

2. Добавьте 1 мкл рестриктазы.

3. Инкубируйте при 37°C 30–60 минут.

3. Советы от R&D отдела

  • На эффективность рестрикции сильно влияет чистота выделенной плазмиды. Наличие этанола, изопропанола, фенола или хлороформа, сорбента для выделения ДНК сильно снижают активность рестриктазы.
  • Во избежание появления неспецифической активности не рекомендуется добавлять фермент больше чем 10% от объема реакционной смеси.
  • Для препаративной рестрикции при количестве ДНК более 1 мкг необходимо подобрать общий объем реакции так, чтобы итоговая концентрация ДНК была 100-150 нг/мкл. На 100 мкл реакционной смеси следует добавлять не менее 2 мкл рестриктазы.
  • Избегайте многократных циклов замораживания-размораживания для реакционного буфера (рекомендуется аликвотирование).
  • Рестриктаза нечувствительна к Dam, Dcm и CpG-метилированию, что позволяет работать с ДНК из любых источников.

4. Спецификация набора

500 реакций
1 пробирка: 500 мкл фермента в буфере для хранения
1 пробирка: 1.5 мл 10X реакционного буфера
1 пробирка: 1.5 мл 6X буфера для нанесения ДНК Нуар
1500 реакций
3 пробирки по 500 мкл фермента в буфере для хранения
2 пробирки по 1.5 мл 10X реакционного буфера
1 пробирка: 1.5 мл 6X буфера для нанесения ДНК Нуар

5. Характеристики

Активность 20 ед./мкл
Инактивация Не инактивируется нагреванием

6. Состав растворов

Буфер для хранения: 10 мМ Tris-HCl, 150 мМ NaCl, 1 мМ DTT, 0.1 мМ EDTA, 200 мкг/мл БСА, 0.15% Triton X-100, 50% глицерин (pH 7.5)
Буфер CutFast (10X): 500 мМ KOAc, 200 мМ Tris-OAc, 100 мМ Mg(OAc)2, 1 мг/мл БСА, pH 7.9

7. Ключевые определения

За одну единицу активности принято количество фермента, которое за 60 минут при 37°C полностью расщепляет 1 мкг ДНК фага λ в реакционном объеме 50 мкл.

8. Условия хранения

Срок годности — 1 год. Фермент и реакционный буфер необходимо хранить при температуре -20°C.

9. Документация и сертификаты